測量總蛋白質(zhì)檢測和分析-分光光度法測量
蛋白質(zhì)的檢測和分析
在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中,需要進(jìn)行兩種測量,較好對每個(gè)組分都
進(jìn)行測量。必須測量總蛋白質(zhì)和目的蛋白的量(通常是測量生物學(xué)
活性)。大多數常用分析方法的。沒(méi)有一種確定蛋
白質(zhì)是否存在的方法,就不可能分離蛋白質(zhì),因此,必須要有一種
分析方法(定量的或至少半定量的)來(lái)確定哪種組分中含有大多數的
目的蛋白。
有的分析方法方便、快捷(如酶活性的即時(shí)分光光度法測量),
有的則是既耗時(shí)又繁瑣的生物學(xué)分析。后者可能需要幾天才能出結
果,而且這種情況很棘手,因為當知道了蛋白質(zhì)在哪個(gè)組分時(shí),蛋
白質(zhì)可能由于降解或失活已經(jīng)丟失,而且,這種丟失直到下一步完
成并對其產(chǎn)物進(jìn)行分析后才能清楚。因此,任何快速的分析方法都
具有優(yōu)勢,盡管往往會(huì )由于加快了分析速度而降低了準確性。
測量總蛋白質(zhì)很有用,因為這可以表明每一步的純化程度,但
除非下一步特別依賴(lài)于有多少蛋白質(zhì)存在,否則總蛋白質(zhì)測量也并
不是十分重要,可以留出一個(gè)小樣品,當純化完成后再進(jìn)行測量。
然而,知道較終產(chǎn)物(假設是純樣品)中有多少蛋白質(zhì)則十分重要,
因為據此可以計算比活(如果該蛋白質(zhì)有活性的話(huà)),并可與其他制
備物的比活進(jìn)行比較。通常的目標是獲得盡可能高的比活(考慮到
回收率),這意味著(zhù)要保留盡可能多的目的蛋白,而較后總蛋白質(zhì)
的量則越少越好。蛋白質(zhì)分離和純化方法
蛋白質(zhì)純化的現有方法范圍很廣,從簡(jiǎn)單的沉淀(從19世紀就
開(kāi)始使用)到復雜的層析和親和技術(shù),后者不斷地得到發(fā)展和改進(jìn)
。方法可被分成幾種不同的類(lèi)別(或許較好的一種是基于正在研究
的蛋白質(zhì)的特性),如根據蛋白質(zhì)的特點(diǎn),可以將方法分成明顯不
同但又相互關(guān)聯(lián)的4組:表面特征、結構、凈電荷和生物學(xué)特性。